关于食品中微生物的检测

一、关于食品中微生物的检测

我国卫生部颁布的食品微生物指标有菌落总数、大肠菌群和致病菌三项。

你已经做过菌落总数，那就只需下面两个了。都是很普通的仪器，但是试剂的话比较多，需要特别购买，不过也是很普通的试剂，在一般的试剂商店能买到。

其实你可以外送检测，不会很贵。如果自己做，就比较烦了。

一、食品中大肠菌群的测定

1、实验材料：温箱、水浴锅、天平、显微镜、均质器或乳钵、温度计、平皿、试管、发酵管、吸管、载玻片、接种针、乳糖—胆盐发酵管、乳糖发酵管、蛋白胨水、靛基质试剂、麦康凯、伊红美蓝琼脂（EMB）、远腾氏琼脂、革兰氏染色液

2、实验方法与步骤

2.1采样及稀释

(1)以无菌操作将检样25g（或25ml）放于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。固体检样最好用无菌均质器，以800r/min～1000r/min的速度处理1min，做成1：10的稀释液。

(2)用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇混匀，做成1：100的稀释液，换用1支1ml灭菌吸管，按上述操作依次作10倍递增稀释液

(3)根据食品卫生要求或对检验样品污染情况估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种3管。也可直接用样品接种。

2.2乳糖初发酵试验

即通常所说的假定试验。其目的在于检查样品中有无发酵乳糖产生气体的细菌将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1ml以上者，用双料乳糖胆盐发酵管；1ml及1ml以下者，用单料乳糖发酵管。每一个稀释度接种3管，置（36±1）℃温箱内，培养（24±2）h，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产生者，则按下列程续进行。

2.3分离培养：将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂板或麦康凯琼脂平板上，置（36±1）℃温箱内，培养18h～24h，然后取出，观察菌落形态并作革兰氏染色镜检和复发酵试验。

2.4乳糖复发酵试验：即通常所说的证实试验，其目的在于证明从乳糖初酵管试验呈阳性反应的试管内分离到的革兰氏阴性无芽胞杆菌，确能发酵乳糖产生气体。在上述的选择性培养基上，挑取可疑大肠菌群1～2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置（36±1）℃的温箱内培养（24±2）h，观察产气情况。凡乳糖发酵管产气，革兰氏染色为阴性无芽胞杆菌，即报告为大肠杆菌阳性；凡乳糖发酵管不产气或革兰氏染色为阳性，则报告为大肠杆菌为阴性。

3报告：根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100ml（g）食品中大肠菌群的最可能数。

二、食品中病原菌的检验：主要有沙门氏菌属、志贺氏菌属、霍乱弧菌属、霉菌真菌等等。国内主要是指沙门氏和志贺氏，试剂主要为SS琼脂。将样品（增菌后）稀释涂布在SS琼脂上面，然后看长出的菌落，找一些图片做对照，一致的话说明有致病菌，没有的话就说明PASS。一般沙门氏或志贺氏菌落是无色透明或粉红色菌落，表面光滑，产硫化氢的菌落中心有黑点。

二、金属切削液如何处理？方法？步骤？仪器？

切削液根据含油量及油相颗粒大小不同，分为乳化、半合成、全合成；

楼主提到臭鸡蛋味，应该是用的含油量高的乳化性切削液，硫酸还原菌及石油弧菌过多产生硫化氢，发臭臭鸡蛋味；这里说明你们的供应商维护工作不好，如果做到以下维护，应该会有改善：

第一，定期检查pH值，pH保持8.5以上大部分真菌是无法存货的。

第二、保证正常使用浓度，一般切削液都内含杀菌剂，浓度低了杀菌剂含量不足，起不到抑菌作用。

第三，我们一般每月都胡为客户抽样分析，做测菌，超过10的4次方就该添加杀菌剂，选用对人无害的异噻唑啉酮类杀菌剂、配合少量广谱杀菌剂。

第四，检查设备情况是不是漏油严重，或是铁屑存积过多，造成部分切削液无法接触氧气，导致厌氧菌繁殖快。

如果楼主感兴趣可以私信我，聊聊切削液方面

三、井水检测哪些元素？

可检测指标:

微生物:菌落总数、大肠菌群、霉菌、酵母菌、沙门氏菌、志贺氏菌、大肠埃希氏菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、产气夹膜梭菌、蜡样芽孢*菌、单核细胞增生李斯特氏菌、军团菌、霍乱弧菌、阪崎肠*菌、空肠弯*菌、铜绿假单胞菌、肠球菌等

感官性状:色度、浑浊度、臭和味、肉眼可见物等

物理指标:PH值、电导率、总硬度、溶解性总固体、挥发酚、阴离子合成洗涤剂等

综合指标:耗氧量、生化需氧量、总有机碳等

金属元素:铍、铅、镉、铬、钾、钙、钠、镁、磷、铁、砷、硒、锌、锡、锰、钴、镍、碘、钒等

四、请问除了PCR荧光检测法之外有更好的诊断方法吗？

环介导恒温核酸扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)，是由Notomi T等在2000年发明的一种新颖的恒温核酸扩增方法，它是一种高灵敏的链置换技术,一种新型的PCR替代技术。

LAMP特点是针对靶基因的6个区域设计了4个特异引物，利用一种链置换DNA聚合酶——Bst(Bacillus stearothermophilus)DNA polymerase在恒温(65℃)的条件下反应1小时即可完成核酸扩增反应，通过荧光染色直接目测比色就可以得到清晰的反应结果。不需要长时间的温度循环，不需要PCR等昂贵的仪器，不需要繁琐的电泳紫外观察等过程。

LAMP技术因其具有高特异性、高效性和快速反应的优越特点，故从2003年逐步被用于医学的临床检测，目前主要是用于食源性病原微生物的检测和传染性疾病的诊断。在日本已经将该技术开发成诊断试剂成功推向市场。

广州华峰生物科技基于LAMP技术已经成功开发出全国首创的LAMP检测试剂盒。依靠华南理工的强大技术背景，该技术产品达到国际先进水平，是国内最新、最快、最简单方便的基因扩增检测试剂盒，其灵敏度高，特异性强，准确率高，检测时间短，不需昂贵的仪器费用，可为中小型医院或研究机构节约成本。

已开发6个食源微生物检测试剂盒：

大肠杆菌0157、单核增生李斯特氏菌、副溶血弧菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、绿脓假单胞菌

已开发18个病原微生物检测试剂盒原型：

甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人免疫缺陷病毒、甲型流感病毒H5N1、单纯疱疹病毒 I、单纯疱疹病毒 II、梅毒螺旋体、结核分枝杆菌、炭疽杆菌、鼠疫杆菌、阴沟肠球菌、嗜肺军团菌、霍乱弧菌、粪肠球菌、志贺氏菌、表皮葡萄球菌。

其中包括食源性病原微生物以及部分传染性疾病病原微生物检测试剂盒在广东省传染病医院、广东省CDC、河北省CDC、广东省出入境检验检疫局、深圳第二人民医院、广州市动物检疫所等权威单位进行评估,准确率均为100%,获得普遍认可。

其外我们还获得6项国家发明专利申请受理，申请了试剂盒产品标准。